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【期刊名称】 《刑事技术》
骨骼DNA快速检验方法
【英文标题】 Rapid Examination of STR Genotyping from Bone DNA
【作者】 陈国林王学为李芳
【作者单位】 丽水市公安局刑侦支队丽水市公安局刑侦支队丽水市公安局刑侦支队
【中文关键词】 法医物证学;骨骼;DNA提取;快速检验法
【英文关键词】 forensic physical evidence; bone; DNA extraction; rapid examination
【文章编码】 1008-3650(2018)05-0387-03
【文献标识码】 A DOI: 10.16467/j.1008-3650.2018.05.009
【期刊年份】 2018年【期号】 5
【页码】 387
【摘要】 目的探讨骨骼DNA提取与快速检验的方法。方法取1年内的碎骨片37份,采用优化的PrepFiler BTA Forensic DNA试剂盒法提取DNA,以GlobalfilerTM Express复合扩增,经3130 xL基因分析仪电泳分离进行STR分型检测。结果37份骨骼样本均获得完整的STR分型,各等位基因峰为200~7500rfu,峰型较均衡。结论采用本文建立的骨骼DNA快速检验法提取骨骼DNA,检验时间短,STR分型结果好,可在实际检案中使用,特别适合于灾害事故遇难者身份识别(disaster victim identification, DVI)的身源鉴定。
【英文摘要】 Objective To explore the method of rapid STR genotyping with the DNA extracted from bones. Methods 37 pieces of bone chips, kept within one year, were selected to undergo the optimized disposal by PrepFiler BTA Forensic DNA kit to have the DNA extracted and the multiplex amplification carried out by GlobalfilerTM Express. Through the electrophoretic separation by the 3130 XL genetic analyzer, the relevant STR g enotypes were obtained. Results All of the 37 skeletal samples have obtained their complete STR genotypes, with the peaks of all allelic genes between 200~7500rfu and the peak patterns showing in quite an equilibrium. Conclusion With its short examination time and better DNA STR genotyping, the here-established method can be used to rapidly extract and examine bone DNA for practical cases, particularly suitable for disaster victim identification (DVI).
【全文】法宝引证码CLI.A.1248892    
  骨骼是DNA检验的一类特殊生物检材,其具有致密组织结构,DNA降解速度相对人体其他组织慢。对于高度腐败和白骨化的尸体案件,骨骼是DNA检验的首选检材,但是由于其特殊的组织结构及环境因素影响,骨骼DNA的提取较为困难。骨骼DNA鉴定的难点在于DNA拷贝低、有外源性DNA污染等{1},因此保证充足的DNA模板量和避免外源性DNA污染是骨骼DNA检验成功的关键。
本文尝试应用ABI公司的PrepFiler BTA Forensic DNA试剂盒提取骨骼DNA,结合GlobalfilerTM Express试剂盒进行STR分型检验,在4.5 h内获得理想的分型结果。
1材料与方法
1.1检材来源
检材来源于本机构日常检案收取的自然灾害和分尸案中的骨骼样本,共计37份。按人体部位分为颅骨5例,胸骨2例,椎骨8例,掌骨7例,跖骨4例,髌骨5例,股骨4例,胫骨2例;按尸体埋藏时间分为1~2周3例,2~3周5例,3~4周6例,4~5周11例,5~6周4例,6~7周1例,7~8周1例,28~29周4例,41~43周2例。
1.2方法
1.2.1样本预处理
用纯水冲洗干净骨骼表面,放通风柜中干燥后,用75%酒精清洗,再晾干。之后,用手术刀片将骨骼表面附着物刮干净,再用手术刀片切取或用压碎机压碎骨骼,取骨密质或骨松质骨碎片约15~100 mg。取样时首选骨松质,因其比骨密质所含细胞量多,故DNA含量相对较多{2},且骨松质结构相对疏松,较易处理{3}。
1.2.2DNA提取
将骨碎片置于1.5 mL离心管中,采用优化的PrepFiler? BTA Forensic DNA试剂盒(ABI公司,美国)提取,步骤如下:1)加入PrepFiler BTA Lysis Buffer 220μL, Proteinase K(ABI公司,美国)10~20μL, DTT溶液(1 mol/L)3μL ;震荡10 s, 1000 r/min离心3 s后,将样本管放在恒温震荡金属浴孵育,56℃孵育1 h。2)将样品管用离心机10000 r/min离心90 s,将上清液转移到新的1.5 mL离心管中,注意不要吸到沉积物,如果转移的上清液过少,需添加PrepFile BTA Lysis Buffer至总体积180μL。3)在离心管中加入300μL PrepFiler Lysis Buffer、15μL磁珠、300μL异丙醇(99.5%分子级),震荡10 s以上,在室温中静置10~20 min。4)震荡样本管10 s,离心3 s,将样本管放置在磁力架(ABI公司,美国)上静置3 min,去除上清液,注意不要碰触磁珠(下同);加入600μL PrepFiler Wash Buffer A洗涤液,从磁力架上取下样本管震荡10 s,离心3 s,将样本管放置在磁力架上静置1 min,去除洗涤液;再次加入300μL PrepFiler Wash Buffer A洗涤液,重复上面的清洗步骤。5)加入300μL PrepFiler Wash Buffer B洗涤液,震荡10 s,离心3 s,将样本管放置在磁力架上静置1 min,去除洗涤液;继续在磁力架上晾干5 min。6)洗脱DNA :在管中加入20μL的PrepFiler? Elution Buffer,震荡至磁珠重悬,将离心管放置在金属浴中70℃孵育10 min,最大速度震荡离心管直到磁珠重悬再离心5 s,将离心管放置到磁力架上静置3 min,直到磁

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【注释】                                                                                                     
【参考文献】 {1}王静,刘雅诚,马万山,等.骨骼DNA分析的应用研究[J].中国法医学杂志,2003, 18(1):35-37.
{2}ONOJA A M. Paternity testing[J]. Niger J Med, 2011, 20(4):406-408.
{3}涂政,陈松,赵龚,等.66年骨骼检验1例[J].刑事技术,2011(2):48-49.
{4}杨周岐,张虎勤,张金,等.古人类骨骼DNA降解影响因素分析[J].第四军医大学学报,2006, 27(1):90-92.
{5}李花,涂政,石屹,等.骨骼脱钙后DNA含量损失问题初探[J].中国法医学杂志,2014, 29(2):141-144.
{6}涂政,刘志芳,陈松,等.牙齿的DNA提取及STR分型研究[J].刑事技术,2007(5):9-11.
{7}贾东涛,韩海军,张玉红,等.陈旧骨骼DNA的提取方法的应用研究[J].中国法医学杂志,2007, 25(4):260-261.
引用本文格式:陈国林,王学为,李芳.骨骼DNA快速检验方法[J].刑事技术,2018, 43(5):387-389.
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