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【期刊名称】 《刑事技术》
4种不同拭子释放人细胞DNA效果的研究
【英文标题】 Effect of Four Different Swabs on DNA Release from the Adhered-toswab Human Cells
【作者】 高林林周志全李佑英
【作者单位】 杭州市公安局刑事科学技术研究所; 杭州市公安局刑事科学技术研究所; 杭州市公安局刑事科学技术研究所
【分类】 司法鉴定学【中文关键词】 法医物证学;拭子;DNA释放能力
【英文关键词】 forensic evidential material; swab; DNA releasing ability
【文章编码】 1008-3650(2019)05-0460-03
【文献标识码】 A DOI: 10.16467/j.1008-3650.2019.05.019
【期刊年份】 2019年【期号】 5
【页码】 460
【摘要】

目的比较4种不同拭子上附着的细胞释放DNA的效果。方法在4N6FLOQSwabsTM植绒拭子、生物检材采集与保存套管、生物物证提取专用棉签拭子以及普通医用棉签拭子上分别滴加5μL全血,制备成原始有核细胞含量基本一致的拭子各40份,将上述拭子根据保存时间不同分为A组(室温1d, 4×20根)与B组(室温30d, 4×20根),采用改良硅珠法提取DNA后应用定量PCR仪检测所提取的模板DNA量,最后用SPSS统计学软件对数据进行分析。结果4N6FLOQSwabsTM植绒拭子所释放的模板DNA量最高,可提高后续DNA检验的成功率;放置30d后虽然模板DNA量有所下降,但所释放的DNA量仍优于其他3种拭子。结论在法医实际案件检验中,尤其对载体上极微量人体细胞的收集应优先选择植绒拭子进行收集及保存,并尽快检验。

【英文摘要】

Objective To compare the effect of four different swabs on releasing DNA from the adhered-to-swab human cells. Methods 5μL evenly-dispersed whole blood was respectively dropped onto 4N6FLOQSwabsTM flocking swabs (40 pieces), biological sample collecting-and-preserving casings (40 ones), forensic cotton swabs (40 ones) and common medical cotton swabs (40 ones). All the swabs were divided into group A (placing at room temperature for 1 day, 4×20 pieces) and group B (placing at room temperature for 30 days, 4×20 pieces). The template DNA was extracted with the modified silica bead method, and followed to undergo the quantitative PCR to test the amount of extracted DNA, with the final data being analyzed by SPSS statistical software. Results The maximal amount of template DNA was released from the 4N6FLOQSwabsTM flocking swabs, having the success rate of subsequent DNA test improved. Even after 30 days, the amount of DNA released by the 4N6FLOQSwabsTM flocking swab, albeit declining, remained higher than the other three handlingdifferent swabs. Conclusion For the actual forensic cases, the priority should be given to the 4N6FLOQSwabsTM flocking swab for sample collection and preservation, especially the tiny quantity of human cells. Additionally, the collected samples ought to be tested as early as possible.

【全文】法宝引证码CLI.A.1280752    
  
  

两步擦拭法常用于采集犯罪现场发现的血痕、精斑以及人体脱落细胞等生物样本。附着在不同拭子上的人体细胞释放DNA的量有无差异,拭子上附着的人体细胞DNA保存的时效性如何,未见有详细报道。为进一步研究现场生物检材采集中常用的拭子释放模板DNA的效率,本文以5μL全血为研究对象,选取DNA实验室常用的4N6FLOQSwabsTM植绒拭子、生物检材采集与保存套管、生物物证提取专用棉签拭子以及普通医用棉签等共4种不同拭子,制备成人体有核细胞数量基本一致的血痕拭子,应用同一种提取方法提取DNA模板,采用定量分析法比较不同拭子所释放出的模板DNA量,并比较同一种血痕拭子随保存时间的延长释放的DNA量有无明显下降。

1材料与方法

1.1主要仪器及试剂

4N6FLOQSwabsTM植绒拭子(LT,美国),生物检材采集与保存套管(广州浩源实验器材有限公司),生物物证专用棉签拭子(公安部物证鉴定中心),普通医用棉签拭子(宁波华成药棉有限公司)。

7500荧光定量仪(LT,美国),恒温混匀仪(Eppendorf,德国),Quantifiler? Trio PCR Reagents(LT,美国),Lysis Buffer(Promega,美国),15%硅珠悬液,Elution Buffer(Promega,美国)。

1.2血痕拭子制备

1.2.1实验样本的编号与分组

准备4N6FLOQSwabsTM植绒拭子(尖头带套管)、生物检材采集与保存套管、生物物证提取专用棉签拭子以及普通医用棉签拭子各40根。每种拭子均分为A组与B组(各20根)。A组编号规则为4N6FLO-QSwabsTM植绒拭子(尖头带套管)编为A1-1至A1-20号,生物检材采集与保存套管编为A2-1至A2-20号,生物物证提取专用棉签拭子编为A3-1至A3-20号,普通医用棉签拭子编为A4-1至A4-20号;同样规则对B组编号。

1.2.2实验样本的制备

采集20名志愿者的静脉血制成EDTA抗凝血,标记为个体1号至个体20号。在A1-1号拭子、 A2-1号拭子、A3-1号拭子、A4-1号拭子、B1-1号拭子、B2-1号拭子、B3-1号拭子及B4-1号拭子的头部各滴1号个体全血5μL,以此类推,共制备血痕拭子160份。将生物物证提取专用棉签血痕拭子以及普通医用棉签血痕拭子均封装于纸质物证袋内,另外2种血痕拭子用拭子自带的套管密封封装。制备好的A组样本在室温(25℃左右)放置1 d后进行DNA提取;制备好的B组样本在室温(25℃左右)放置30 d后进行DNA提取。

1.3方法

1.3.1样本的DNA提取

样本置于1.5 mL离心管内,加入Lysis Buffer裂解液400μL, 95℃裂解30 min,离心,将上清液转移至另一干净离心管内,加入15%硅珠悬液40μL后置于恒温混匀仪(25℃,900 r/min)上放置30 min, 70%冷乙醇洗涤2次后挥干残余乙醇,之后加入Elution Buffer洗脱液30μL在56℃洗脱10 min,离心取上清液备用。

1.3.2样本的DNA定量

采用Quantifi ler? Trio PCR Reagents试剂盒在7500荧光定量仪上对DNA模板进行定量。体系为20μL,其中Mix 10μL、Primer 8μL、DNA模板2μL。荧光定量程序按照Quantifi ler? Trio PCR Reagents试剂盒推荐的程序进行。

1.4统计学分析

采用SPSS 19.0软件,应用方差分析对不同种类拭子间数据进行统计学处理,同种拭子组间比较用配对t检验,数据应用x±s表示,检验水准α=0.05。

2结果

2.1 A组样本检验结果定量比较

A组样本中4种不同的拭子释放血痕DNA的结果见表1。4N6FLOQSwabsTM拭子得到的DNA含量最高,均值为(2.253±0.775)ng/μL。其他3种拭子所获得的DNA含量相差不大,与4N6FLOQSwabsTM拭子相比,均具有统计学差异(P<0.05)。

表1 A组样本中4种不同拭子DNA定量结果比较(n=20,x±s)

Table 1 Comparison of DNA quantity released from four different swabs in group A (n=20, x±s)

┌──────────────────┬────────┬────┬─────┐
│拭子类型              │DNA质量浓度(ng/ │F值   │P值    │
│                  │μL)      │    │     │
├──────────────────┼────────┼────┼─────┤
│4N6FLOQSwabsTM植绒拭子       │2.253±0.775  │2.815  │0.045   │
├──────────────────┼────────┤    │     │
│生物检材采集与保存套管       │1.729±0.7071) │    │     │
├──────────────────┼────────┤    │     │
│生物物证提取专用棉签拭子      │1.767±0.631  │    │     │
├──────────────────┼────────┤    │     │
│普通医用棉签拭子          │1.713±0.6461) │    │     │
└──────────────────┴────────┴────┴─────┘

注:1)表示与4N6FLOQSwabsTM植绒拭子相比,P<0.05。

2.2 B组样本检验结果定量比较

制备好的拭子在室温放置30d后B组所有样本的DNA含量均有下降,但普通医用棉签拭子的DNA含量最低,其均值只有(0.812±0.366) ng/μL, 差异具有统计学意义(表2)。生物检材采集与保存套管和生物物证提取专用棉签拭子所提取的DNA含量居中,二者之间未表现出统计学差异。

表2 B组样本中4种不同拭子DNA定量结果比较(n=20

  ······

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【注释】                                                                                                     
【参考文献】

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